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HPLC常见峰形及异常情况

一、HPLC全称高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography),是一种快速的分离阐发技巧。HPLC具有高效、高速、高灵敏度、适用范围广和流动相选择范围广等特征,因而成长迅速,并在医药、食物、化妆品和农药等很多行业有着广泛的利用。

二、HPLC峰形

HPLC阐发历程中,因为各类缘故原由,常常会呈现一些非常峰形,严重影响对结果的阐发,给实验职员带来很大年夜的困扰。下面先容一些常见的峰形以及可能的缘故原由:

1. 未出峰

可能的缘故原由:

a.未成功进样,或样品未消融进溶剂中,或样品分化变质或样品浓度太低;

b.仪器本身的问题:泵或者检测器故障;

c.流动相选择分歧适,如对付反相硅胶柱来说,若流动相极性太大年夜,是冲不下来一些小极性的物质的,物质不停保留在柱子中,因而不出峰。

d.检测器分歧适,如:有些产品没有紫外接受或者接受很弱,然则检测还应用了UV检测器2.平头峰

可能的缘故原由:

a. 样品浓度过大年夜或进样体积太大年夜,这个也是大年夜多半缘故原由

b. 检测器设置不精确

可能的缘故原由:

a.流动相接受本底值过高

b.进样历程中进入空气

c.样品组分的接受低于流动相

d.配制样品的溶剂与流动相不同等4.肩峰

可能的缘故原由:

a.进样量过大年夜;样品浓度过高

b.保护柱或色谱柱柱头堵塞

c.保护拄或色谱柱污染或掉效

d.色谱柱柱头塌陷

5.裂峰

可能的缘故原由:

a. 溶剂效应:消融样品用的溶剂和肇端流动相极性相差太大年夜

b. 保护柱或色谱柱柱头堵塞

c. 保护拄或色谱柱污染或掉效

d. 色谱柱柱头塌陷

6.鬼峰

鬼峰(ghost peak)是在某个谱图里呈现,可能同样的前提再做一次又不呈现了,时无意偶尔无的峰。

可能的缘故原由:

a. 进样阀残存峰,在每次进完样后用充沛的光阴来平衡和洗濯系统

b. 样品中存在未知物,改进样品的预处置惩罚

c. 流动相污染,替换新流动相(或者换品牌);尽可能现配现用,隔夜的流动相再次应用时要过滤

d. 流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大年夜流速扫除7. 前伸峰

可能的缘故原由:

a. 进样量或样品浓度高

b. 消融样品的溶剂比流动相极性强

c. 保护拄或色谱柱污染或掉效

d. 流动相分歧适,替换新流动相(调pH或换种类、比例等)

8. 拖尾峰

可能的缘故原由:

a. 进样量或样品浓度高

b. 流动相分歧适,替换新流动相(调pH或换种类、比例等)

c. 硅羟基感化:加入三乙胺,用碱致钝化柱增添缓冲液或盐的浓度低落流动相pH值,钝化样品

d. 柱内烧结不锈钢掉效:替换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

e. 色谱柱柱头塌陷或柱效下降:替换色谱柱

注:除以上非常峰形外,HPLC检测历程中,还有很多其它环境,小伙伴们可以从仪器本身、流动相、固定相(色谱柱)、柱温和等度与梯度措施学等方面,调剂参数,终极找到一种最相宜的HPLC措施。

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